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生化試劑盒實(shí)驗(yàn)操作視頻和相關(guān)解析

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生化試劑盒相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作視頻


圖片


操作相關(guān)說(shuō)明和注意事項(xiàng)


一、操作步驟

1. 打開(kāi)試劑盒,對(duì)照說(shuō)明書(shū)逐一取出各個(gè)試劑,了解各試劑的狀態(tài)和規(guī)格。


2. 通讀說(shuō)明書(shū),準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需儀器、用具(酶標(biāo)儀/分光光度計(jì);金屬浴/水浴鍋;渦旋振蕩儀;96孔板/1mL比色皿等)。

提示:建議在試驗(yàn)前通讀一遍說(shuō)明書(shū),了解實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),提前設(shè)置好實(shí)驗(yàn)所需溫度。


3.進(jìn)行樣本采集和存儲(chǔ)。生化試劑盒實(shí)驗(yàn)多數(shù)為酶活測(cè)定或含量測(cè)定實(shí)驗(yàn),采集后的樣本建議在-20℃以下低溫保存。


4.按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行樣本前處理,詳細(xì)的樣本處理步驟大家可以參考B站上我們樣本前處理的視頻。

提示:提取后的樣本上清液建議在當(dāng)天使用完,現(xiàn)用現(xiàn)配(反復(fù)凍融會(huì)影響樣本酶活或含量)。


5.按照說(shuō)明書(shū)測(cè)定步驟,依次加入各個(gè)試劑。

提示:為確保反應(yīng)進(jìn)行,建議按照說(shuō)明書(shū)加樣表依次加入各個(gè)試劑,(有些試劑盒加樣順序可能會(huì)影響反應(yīng))。


6.依次加入各個(gè)試劑后建議充分混勻,以確保顯色反應(yīng)完。

提示:為確保顯色反應(yīng),必須保證反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確,注意是否為避光實(shí)驗(yàn)。


7.反應(yīng)結(jié)束后,在酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)上進(jìn)行測(cè)定,并按照說(shuō)明書(shū)計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算、分析。

提示:反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)立即測(cè)定,有些試劑盒反應(yīng)結(jié)束后需要在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行測(cè)定,時(shí)間過(guò)久可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

二、注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前,建議通讀說(shuō)明書(shū),了解實(shí)驗(yàn)各個(gè)步驟,并挑選2-3個(gè)樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

2. 實(shí)驗(yàn)前確定使用的儀器用具,如玻璃比色皿/石英比色皿;96孔普通版/96孔UV板/96孔石英板(尤其注意最終反應(yīng)液溶劑是否為有機(jī)試劑,是否可用塑料材質(zhì)的96孔板)。

3. 實(shí)驗(yàn)前按照說(shuō)明書(shū)溶液的配制,將各個(gè)試劑進(jìn)行充分溶解,-20℃保存的試劑建議分裝后保存,避免反復(fù)凍融;現(xiàn)配現(xiàn)用的試劑,建議根據(jù)樣本量進(jìn)行計(jì)算后配制使用。

4. 如果樣本吸光值超過(guò)線性范圍,可以增加樣本量、延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式。

5. 如需按照蛋白濃度進(jìn)行計(jì)算,建議查看說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng),確定本試劑盒提取的上清液是否可以用于蛋白濃度測(cè)定,若提取液中含有蛋白質(zhì)沉淀劑或前處理過(guò)程使蛋白變性,需另取樣本測(cè)定蛋白濃度。

6. 若樣本量過(guò)多,建議分批次進(jìn)行實(shí)驗(yàn);連續(xù)幾天進(jìn)行測(cè)定時(shí),確保試劑、儀器和操作步驟一致,避免儀器和人工誤差。

提示:各個(gè)試劑盒因?qū)嶒?yàn)原理,測(cè)定方法各有差異,建議實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真閱讀該試劑盒的注意事項(xiàng)。



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