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產(chǎn)品名稱:D2810 DNA退火緩沖液

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產(chǎn)品特點:D2810 DNA退火緩沖液
保存條件:
-20℃保存,一年有效。

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D2810 DNA退火緩沖液的詳細資料:

D2810 DNA退火緩沖液

把要退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的三蒸水配制成50μM。解凍Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),混勻備用。如經(jīng)常使用,本Buffer可放置2-8℃一個月。
2. 如下設(shè)置退火反應(yīng)體系:

Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)20μl
DNA oligo A(50μM)20μl
DNA oligo B(50μM)20μl
Nuclease-Free Water40μl
總體積100μl


按照上述順序依次加入各種試劑,混勻。放入PCR儀。
3. 如下設(shè)置PCR儀進行退火反應(yīng):

步驟溫度時間說明
195℃2分鐘讓oligo充分變性
2每8秒下降0.1℃,降25℃(注1)約90分鐘退火
34℃長時間保持暫時存放


注1:如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能,也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。
4. 退火結(jié)束后可以直接用于連接反應(yīng),也可以在-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進行酶切等其它反應(yīng),好用純化試劑盒進行純化,或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過10%,以避免AnnealingBuffer對后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。

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