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產(chǎn)品名稱:谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):BC1450

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:GLS(EC 3.5.1.2)存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
測(cè)定原理:GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算其酶活性。

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BC1450谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

一、粗酶液提取:細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4 個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)420nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣品測(cè)定(在 EP 中加入下列試劑):試劑名稱(uL) 測(cè)定管 對(duì)照管樣本 25 蒸餾水 25 試劑一 100 100 試劑二 400 400 混勻,37℃水浴1 小時(shí)試劑三 525 525 混勻,8000 g,25℃離心10 min;取上清液,在EP 管中加入下列試劑上清液 650 650 試劑四 150 150 試劑五 100 100 試劑六 100 100 混勻,420nm 處讀取吸光值 A,計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管

三、計(jì)算:

1、 血清(漿)GLS 活性單位定義:每mL 血清(漿)每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS(μmol /min/mL)=363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA-0.1301)

2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞GLS 活性

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:?jiǎn)挝欢x:每mg 蛋白質(zhì)每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS(μmol /min /mg prot)=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:?jiǎn)挝欢x:每g 組織每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS(μmol /min /g 鮮重)=363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 樣總) ÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷W。

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位定義:每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS(μmol /min /10 4 cell)=363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 樣總)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301) V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

GLS(EC 3.5.1.2)存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。 GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算其酶活性。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

試劑一×1 瓶,60 mL,4 ℃保存;試劑二×1 瓶,20 mL,4 ℃保存;試劑三×1 瓶,30 mL,常溫保存;試劑四×1 瓶,10 mL,常溫保存;試劑五×1 瓶,6 mL,常溫保存;試劑六×1瓶,6 mL,常溫避光保存。

 

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