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產品名稱:α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

產品型號:BC0710

產品報價:

產品特點:α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒
測定意義:α-KGDH(EC1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。

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BC0710α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒的詳細資料:

α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

 

產品名稱:  α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

產品英文名:   αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit

產品貨號:BC0710            產地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產品規(guī)格:50管/48樣          產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價格:1300
庫存狀態(tài):現貨                          
關鍵字:    α酮戊二酸脫氫酶檢測試劑盒|α-KGDH檢測試劑盒|α酮戊二酸脫氫酶|試劑盒

簡要介紹:
α-KGDH(EC1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。


產品詳細描述
產品內容
試劑一:液體60mL×1瓶,4保存;
試劑二:液體0.6mL×1支,-20保存;
試劑三:液體55mL×1瓶,4保存;
試劑四:粉劑×1支,4保存;
試劑五:粉劑×1支,4保存;
試劑六:粉劑×1支,-20保存;
試劑七:粉劑×1支,-20保存;
試劑八:粉劑×1支,-20避光保存。臨用前加入2mL雙蒸水充分混勻待用,用不完的試劑仍-20保存。
工作液的配制:臨用前把試劑四、試劑五、試劑六、試劑七轉移到試劑三中混合溶解待用。

產品說明
   α-KGDHEC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和 NADH,NADH340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

試驗所需自備儀器和樣品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、α-KGDH的提取
稱取約0.1g組織或收集約500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑二,冰浴用勻漿器或研缽充分研磨,4  11000 g離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調零
2. 空白管:
1mL工作液加入1mL石英比色皿,37孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL試劑八和60μL蒸餾水,混勻并立即測量340nm0s的吸光值A1,37準確反應2min,記錄340nm2min時的吸光值A2,計算ΔA空白=A2-A1。
3.測定管:
1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37(哺乳動物)或25(其它物種)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL試劑八和60μL樣本,混勻并立即測量340nm0s的吸光值A337(哺乳動物)或25(其它物種)中準確反應2min,記錄340nm2min時的吸光值A4,計算ΔA測定=A4-A3。
三、α-KGDH活性計算
1.按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。
 α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(Cpr×V) ÷T
=1473.7×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr
2.按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。
 α-KGDHU/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×W)÷T
=1488.5×(ΔA測定-ΔA空白)÷W
3. 按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。
α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA測定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×500)  ÷T
=2.977×(ΔA測定-ΔA空白)
V反總:反應體系總體積,1.1×10-3 LεNADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.06mLV樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mLT:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意事項
1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。
4、測定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進行稀釋。

相關文獻:
《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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