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    乳酸含量（LA）檢測(cè)試劑盒 微量法

測(cè)定意義：乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類(lèi)代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理：乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。

需要的儀器，耗材：天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、

   乳酸含量（LA）檢測(cè)試劑盒 微量法

一、樣本處理 1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測(cè)定。 2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；于4℃， 12000g離心10min，取上清測(cè)定。 3. 血清：直接測(cè)定。二、測(cè)定操作樣品對(duì)照管 樣品測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管樣品（μL） 50 50 標(biāo)準(zhǔn)品（μL） 50 50 Solarbio  H2O（μL） 300 450 300 450 試劑一（μL） 150 150 試劑二（μL） 200 200 200 200 顯色液（μL） 300 300 300 300 充分混勻，于37℃反應(yīng)30min，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定530nm處吸光值，分別記為A1，A2，A3，A4，△A樣=A2-A1；△ A標(biāo)= A4-A3 注意：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管和標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管只需測(cè)定一次 ，每個(gè)樣品測(cè)定管設(shè)一個(gè)樣品對(duì)照管。

1. 按照蛋白含量計(jì)算 LA含量（μmol/mg prot）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ Cpr = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ Cpr 2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算 LA含量（μmol/g鮮重）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ W = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ W 3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 LA含量（μmol/104 cell）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量 = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量 4. 按照液體體積計(jì)算 LA含量（μmol/mL）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo) = 2×△A樣÷△A標(biāo) C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L，W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

相關(guān)文獻(xiàn):

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate》 作者:Xiaojin Luo, Weihua Shi , Haoming Yu , Zhaoyang Xie , Kunyi Li  and Yue Cui  期刊:Sensors 影響因子:3.031 PMID:30314270